聚焦靶点BRAF——BRAF相关突变细胞强势登场
发布时间:2024/05/16分类:技术文章来源:3044am永利集团
Background
BRAF属于RAF家族，RAF-家族包含3个成员，其中还有ARFA基因以及CRAF基因。BRAF是最重要的原癌基因之一，负责编码一个传递细胞信号的RAF激酶蛋白，该蛋白属于RAS-RAF-MEK-ERK信号通路（即MAPK/ERK通路）的一部分。
BRAF基因改变为BRAF突变、BRAF激酶区复制和BRAF融合三种。BRAF突变最初在黑色素瘤中发现，随后在结直肠癌、甲状腺乳头状癌和肺癌等多种肿瘤中检测出BRAF突变。在中国人群中肺癌BRAF KDD比例为0.03%，BRAF融合的比例为0.04%。在NSCLC中，BRAF激酶区复制（BRAF KDD）和BRAF融合比较罕见，不到0.5%，BRAF突变率为1.5%~5.5%，其中以BRAF V600突变最为常见，占所有BRAF突变类型的30%~50%。BRAF突变是晚期NSCLC患者的不良预后因子之一。
BRAF突变根据活化的机制不同，分为三种类型：
1. Ⅰ类BRAF基因改变(BRAF V600 D/E/K/R/M突变)，可导致强烈激活BRAF激酶活性，对EGFR靶向治疗不敏感，对BRAF单体抑制剂（达拉非尼，维罗非尼和康奈非尼）或MEK抑制剂（曲美替尼，比美替尼和考比替尼）或二者联合方案敏感 。
2. Ⅱ类BRAF基因改变 ( K601、L597、G464 和 G469等以及BRAF激酶区复制和BRAF融合），不需要依赖RAS的表达激活，对BRAF二聚体抑制剂（Lifirafenib，LY3009120和LXH254）或MEK抑制剂或二者联合方案敏感。
3. Ⅲ类BRAF基因改变（G466、N581、D594 和 D596等），该类突变使BRAF失去激酶活性，需要依赖上游RAS的表达激活，BRAF抑制剂±MEK抑制剂或BRAF二聚体抑制剂±MEK抑制剂或MEK抑制剂无效，可能对EGFR单抗敏感。
研发现状
BRAF作为抗肿瘤治疗中一个热门的分子靶点，尽管目前已有20多项临床研究正在进行中，但是其中Ⅱ、Ⅲ期研究仍然较少，高效的靶点抑制剂值得进一步探索。对于甲状腺肿瘤、非小细胞等肿瘤患者来说，成为了常见以及必须检测的突变基因，可见其重要性。
靶向抑制BRAF蛋白的药物，目前根据其作用机制分为2类，一类是广谱的RAF激酶抑制剂，对RAF各亚型、其他激酶如KIT、血管内皮生长因子受体(VEGFR)等也有抑制，具有抗肿瘤及抗血管生成作用，对于BRAF的突变体的类型无特殊要求。例如索拉菲尼(Sorafenib)。
第二类是BRAF V600E抑制剂，对BRAF尤其是BRAF V600E有很高的抑制活性,代表为威罗菲尼、达拉菲尼、康奈菲尼等。
针对该突变目前已有多种药物可用，但是更精准的靶向药物还在研发中，开发新型 BRAF 及 MEK 抑制剂、靶向联合免疫治疗、EGFR-TKI 联合 D+T 三靶治疗获得性 BRAF V600E 突变等是未来努力的方向。
而对于BRAF基因融合突变驱动的肺癌，目前仍缺乏有效治疗方式。
BRAF靶点药物细胞筛选模型
针对BRAF靶点药物开发研究的需求，科佰开发了多种BRAF靶点相关的药筛细胞模型，模拟体内相关作用机理，可快速便捷筛选候选药物、体外活性检测以及放行阶段的QC检测。
部分细胞sanger测序结果展示
Figure 1. Sanger of different BRAF cells.
Figure 2. CTG proliferation assay of different BRAF cells.
