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引物探针

背景

分子诊断技术里,引物和探针是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列,作为核苷酸聚合起始的关键引导分子,其长度一般在18到27个碱基对,这与 Tm 值及特异性有关,太长(大于 38 个碱基对)会使延伸温度超 74℃,超出 Taq DNA 聚合酶适宜反应温度范围,影响酶活性与 DNA 复制。

在PCR过程中,引物至关重要,是 DNA 聚合酶启动复制提供起点。一个引物与靶区域一端的模板链互补配对,另一个与另一端互补结合,为聚合酶指明起始位置。PCR 启动、温度升高使 DNA 模板链解旋成单链后,引物依碱基互补配对原则与特定区域结合,DNA 聚合酶识别结合位点,从引物 3’端添加核苷酸,沿 5’到 3’端延伸新链,循环往复实现 DNA 片段指数级扩增,引物就像建高楼的基石,保障 PCR 高效推进。

探针是带标记核酸序列,靠分子杂交与目标核酸序列特异性结合,精准探测目标。是分子诊断关键''利器'',可为DNA或RNA序列,带有如“信号灯”般的标记物。生物样本核酸分子多,无标记时,探针与目标核酸结合的微弱信号易被淹没。有标记物后,探针与目标序列结合,能通过放射性同位素自显影、荧光染料发光或化学物质显色等发出易捕捉信号,助研究者了解目标核酸情况。

引物探针介绍


 

dPCR引物探针

 

qPCR引物探针

数字PCR是一种精确计数目标序列拷贝数的方法基于泊松分布,通过将待检测样本分成许多独立的反应区块(微滴或芯片上的微小反应室),每个区块中只存在0个或1个目标序列查看更多

 

qPCR是一种定量检测目标序列拷贝数的方法。它基于标准曲线法,在PCR扩增过程中实时测量扩增产物的数量  查看更多

 

   

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