KRAS[G12D&Y96D] BaF3

      KRAS 基因是 RAS 基因家族成员之一。在 RAS 基因家族中，还有 NRAS 和 HRAS。 KRAS 是一种小鸟苷三磷酸酶，通过将膜生长因子受体与细胞内信号通路和转录因子偶联， 在细胞增殖、分化、存活和代谢等生物过程中充当开关。

      KRAS 突变通常发生在 KRAS 基因的氨基酸残基 12、13 或 61 处，残基 12 （G12C、 G12D、G12R、G12A、G12S 和 G12V ） 是最常见的突变位点。KRAS[G12C]是非小细胞 肺癌（NSCLC）中最常发生的基因突变之一，它激活了 RAS/MAPK 信号通路并维持增殖 信号的转导，从而促进肿瘤细胞的生长和扩散。KRAS 是癌症中最常见的基因突变之一， 约 90%的胰腺癌肿瘤中都能检测到 KRAS 突变，接受化疗的胰腺癌患者的诊断后生存期通 常只有 6~12 个月，且只有不到 40%的胰腺癌患者会对 KRAS 抑制剂治疗产生反应。

      免疫治疗是 NSCLC 的一种新兴疗法，可通过激活患者的免疫系统抑制肿瘤生长。有 研究表明，激活 KRAS 信号通路可上调 PD-L1 表达。KRAS 突变的肿瘤往往含有较高的肿 瘤突变负荷和较多的肿瘤浸润淋巴细胞，表明 KRAS 突变通常与炎症性肿瘤微环境和肿瘤 免疫原性相关，为免疫疗法提供了理论依据。

      BaF3（小鼠原 B 细胞）的生长和增殖需要 IL-3 的维持。通过引入各种表达激酶的基因， 能作为 BaF3 的驱动基因，让 BaF3 不再依赖 IL-3 而增殖，进而激酶基因成为 BaF3 增殖依 赖的驱动基因，用于评估小分子药物对激酶的靶向抑制作用，原理及流程见下图所示。
 

Figure 1. KRAS[G12D&Y64H] BaF3 细胞的构建原理图

1. WB of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3



Figure 2. WB of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3


2. Sanger of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3

Figure 3.  Sanger of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of KRAS[G12D&Y96D] BaF3 (C1).