MERS-ORF1ab/RdRP Pseudovirus Standard Reference

Middle East Respiratory Syndrome (MERS) 于2012年在沙特阿拉伯首次报道，此后已传播到包括美国在内的其他几个国家。大多数感染了MERS-CoV的人都出现了严重的呼吸系统疾病，包括发烧，咳嗽和呼吸急促。他们中许多人已经死亡。MERS属于一种冠状病毒，是一类具有囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，对应的结构示意图如下：

根据CDC和WHO的介绍，针对MERS的核酸诊断一般是针对RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene upE/E， Gene S更多用于对应药物和疫苗的开发。NCBI收录序列为NC_019843.3，全长30119bp，基因编码4个结构蛋白：S，M，N和E。

以往针对试剂盒检测限的性能评价，一般是选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品，用于性能评价。但是两者都具有很明显的确定，首先体外转录的RNA，一般是很纯，单一，不涉及提取，不符合临床病毒的微环境，因此必然造成检测灵敏度被高估，这也是存在高概率假阴性的主要原因；再次临床阳性病毒，即使是灭活的病毒，也是存在很大的生物安全隐患，因此要求实验室级别为P3-P4，大部分开发诊断试剂盒单位都不满足改要求，另外临床阳性病毒也是来源很有限，不能被稳定供应，反复用于试剂盒的性能评价。

有病毒的完整包膜结构，有MERS对应的核酸序列，但是生物安全风险较低的假病毒标准品，完美的克服了选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品的缺点，非常适合用于核酸诊断性能评价的标准品。

构建过程：MERS基因合成→假病毒包装→纯化→QC检测（ddPCR）

ORF1ab/RdRP(2798bp)

• 根据MERS冠状病毒的特点，选取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合计3个区段的序列，用于假病毒的包装，3个区段很好的表征了MERS的特征序列；

• 3044am永利集团设计了ddPCR体系的引物、探针序列，可不需要构建标准曲线的前提下完成对假病毒的QC拷贝数检测，非常准确表征标准品的拷贝数，而且克服了Q-PCR分析CT值的相对判断标准的不准确性；

• 假病毒标准品，无致病性，可再生，质控方法可靠，批次间稳定，可以长期稳定制备和供应，而且要求实验室生物安全级别为P2，满足很多单位的安全需求。

ORF1ab/RdRP:

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