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ISRE-Luc/NFκB-SEAP/THP-1

CBP74097

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I. Background
      STING(干扰素基因刺激因子)又称 MPYS、TMEM173、MITA 和 ERIS,是一种跨膜蛋白,是环状二核苷酸(CDN)的直接传感器。CDN 是细菌信号转导中普遍存在的第二信使分子,是哺乳动物细胞的防御触发器。当细菌病原体攻击时,释放到细胞中的 CDN 直接与 STING 结合,激活的 STING 和 TANK 结合激酶-I (TBK1) 相互作用以诱导活性干扰素调节因子 (IRF3) 二聚体,然后该二聚体与细胞核中的干扰素刺激反应元件 (ISRE) 结合并导致 IFN-α/β 的产生。IFNβ 的产生是 STING 活化的标志。肿瘤微环境(TME)中由于天然免疫产生的信号传导是导致肿瘤特异性 T 细胞激活和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)浸润的关键因素。其中尤其以 I 型 IFN 对肿瘤特异性 T 细胞的活化最为关键。因此,STING 激动剂可以通过诱导Ⅰ型干扰素基因的表达,激活包括树突状细胞等免疫刺激细胞,改变肿瘤微环境并诱导肿瘤特异性 T 细胞的产生,从而通过调节免疫系统达到抗肿瘤的目的。 
 
II. Description
      针对 STING 激动剂和拮抗剂的药物发现,利用 STING 蛋白调控干扰素(interferon,IFN)及其下游基因表达的原理,在 THP-1细胞上构建了 2个诱导型的报告基因系统:一个是干扰素刺激反应元件(ISRE),下游接入 Luc 的分泌型荧光素酶,可以在底物的刺激下,催下产生化学发光信号,该报告基因可以评估 IFR通路,比如 type I IFNs and RLR (RIG-I-like receptor), CDS (cytosolic dsDNA sensor) or STING agonists;另外一个是 NFκB 通路,下游接入分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因,可以响应与 NFκB 通路相关的一些刺激。ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 报告基因药靶模型很好地模拟信号转导过程。



Figure 1. ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 细胞模型原理图
 
III. Introduction
Host Cell: THP-1
Expressed gene: ISRE
Stability: 32 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.)
Synonym(s): NF-kB reporter, NFkappaB reporter, luciferase reporter, NF-kB reporter, NFkB reporter, nfkb thp1, thp1, NF-kB, nfkb, nf-kb
Freeze Medium: 90% FBS+10% DMSO
Culture Medium: RPMI-1640+10%FBS+10 µg/ml of blasticidin+ 100 μg/ml of Zeocin
Mycoplasma Testing: Negative
Storage: Liquid nitrogen
Application(s): Functional(Report Gene) Assay
 
IV. Description of Host Cell Line
Organism: Homo sapiens, human
Tissue: Peripheral blood
Disease: Acute monocytic leukemia
Morphology: Monocyte
Growth Properties: Suspension
 
Ⅴ. Representative Data

Figure  2. STING Stimulation Assay 验证结果
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