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EML4-ALK V1/BaF3

CBP73185

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I. Background

      棘皮微管相关蛋白(Echinoderm microtubule-associated protein,EMAP)在海胆中表达, 是第一个被鉴定的 EMAP 样蛋白(EML)家族成员。它是海胆卵微管(MT)制剂的主要成分, 也被发现在间期和有丝分裂时与微管蛋白共定位。

      ALK 是胰岛素受体超家族的一员,首次在间变性大细胞淋巴瘤中通过与核磷蛋白 (NPM)融合发现。癌细胞中的 ALK 信号传导通过三种主要机制发生:基因融合、基因 扩增和点突变。

      在肺癌中检测到的第一个致癌融合是 EML4-ALK,由 2 号染色体短臂上的一个小倒位 产生,促进 EML4 N 末端与 ALK(外显子 20)的融合。一旦 EML4 中的断点出现在不同 的外显子(2、6、13、14、15、18 和 20)中,EML4-ALK 融合蛋白就会呈现多种变体。 其中 EML4-ALK 融合中最常见的变体亚型为 V1 和 V3a/b,约占所有 EML4-ALK 融合突变 的 70%。不同 EML4-ALK 变体的表达可能会影响对 ALK TKI 的反应,从而影响继发性耐 药特异性 ALK 突变的发展倾向。EML4 与 ALK 激酶结构域的融合导致异常信号传导,从 而增加细胞生长、增殖和细胞存活。在 NSCLC 患者的 ALK 中检测到的点突变约占观察到 的耐药机制的三分之一,其中最常见的是 p.L1196M(类似于 EGFR 的 p.T790M)。其他确 定的突变有 p.1151Tins、p.L1152R、p.C1156Y、p.I1171T、p.F1174L、p.V1180L、p.G1202R、 p.D1203N、p.S1206Y 和 p.G1269A 。这些突变增加了酪氨酸激酶受体与 ATP 的亲和力,降 低了 TKI 的结合亲和力。ALK 基因突变,例如 p.1151Tins 和 p.G1202R,导致对第二代 ALK TKI 产生耐药性;p.L1196M 和 p.L1152R 赋予对第二代和第三代 ALK TKI 的敏感性; p.G1202R 导致对第一代和第二代 ALK TKI 产生耐药性。

 
II. Description

      BaF3(小鼠原 B 细胞)的生长和增殖需要 IL-3 的维持。通过引入各种表达激酶的基因, 能作为 BaF3 的驱动基因,让 BaF3 不再依赖 IL-3 而增殖,进而激酶基因成为 BaF3 增殖依 赖的驱动基因,用于评估小分子药物对激酶的靶向抑制作用,原理及流程见下图所示。
 



Figure 1. 
EML4-ALK V1 BaF3 细胞的构建原理图

III. Introduction
Cell Line Name: EML4-ALK V1/BaF3
Host Cell: Ba/F3
Stability: 16 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.)
Application: Anti-proliferation assay and PD assay
Freeze Medium: 90% FBS+10% DMSO
Complete Culture Medium: RPMI-1640+10%FBS
Mycoplasma Status: Negative
 
IV. Representative Data

1. WB of EML4-ALK V1/BaF3 expression

Figure 2. WB of ALK expression
Lane 1: Ba/F3
Lane 2: Ba/F3_EML4-ALK v1
Lane 3: Ba/F3_EML4-ALK v1 L1196M

2.Sanger of EML4-ALK V1/BaF3



Figure 3. Sanger of 
EML4-ALK V1/BaF3

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CCK8 Proliferation Assay of EML4-ALK V1 WT BaF3 Cell.

 

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